植物組織RNA提取的技巧
從植物組織中提取RNA 是進(jìn)行植物分子生物學(xué)方面研究的必要前提。要進(jìn)行Northern雜交分析，純化mRNA 以用于體外翻譯或建立cDNA文庫，RT-PCR及差示分析等分子生物學(xué)研究，都需要高質(zhì)量的RNA 。因此，從植物組織中提取純度高、完整性好的RNA 是順利進(jìn)行上述研究的關(guān)鍵所在。
從文獻(xiàn)報(bào)道上看，有許多植物就是由于未能有效地分離純化其組織中的RNA ，而阻礙了其分子生物學(xué)方面研究的進(jìn)展。一般認(rèn)為在這些植物組織中，或富含酚類化合物，或富含多糖，或含有某些尚無法確定的次級(jí)代謝產(chǎn)物，或RNase的活性較高。在完整的細(xì)胞內(nèi)這些物質(zhì)在空間上與核酸是分離的，但當(dāng)組織被研磨，細(xì)胞破碎后，這些物質(zhì)就會(huì)與RNA 相互作用。酚類化合物被氧化后會(huì)與RNA 不可逆地結(jié)合，導(dǎo)致RNA 活性喪失及在用、抽提時(shí)RNA 的丟失，或形成不溶性復(fù)合物；而多糖會(huì)形成難溶的膠狀物，與RNA 共沉淀下來；萜類化合物和RNase會(huì)分別造成RNA 的化學(xué)降解和酶解。對(duì)于這些植物材料，用常規(guī)的RNA 提取方法（如胍法、法和十六烷基*基溴化胺法等）難以提取出其RNA 。如Lбpez-Gбmez等在用常規(guī)的方法提取芒果果實(shí)的RNA 時(shí)未能成功，他們的結(jié)果分為三種情況：提出的RNA 已被降解；RNA 的得率很低；得到的RNA 不能進(jìn)行體外翻譯。他們認(rèn)為在果實(shí)成熟時(shí)各種酶的活性增強(qiáng)，其中也包含RNase，不溶性的淀粉轉(zhuǎn)化為可溶性的多糖，芒果果實(shí)細(xì)胞壁中特殊的成份，以及果實(shí)中高含量的多酚化合物都是干擾RNA 提取的因素。Tesniere等在用法和胍法提取葡萄果實(shí)的RNA 時(shí)，發(fā)現(xiàn)RNA 與某種未知化合物凝聚成不溶性的復(fù)合物，并且這種未知化合物在230nm和270nm處有強(qiáng)的光吸收，從而干擾了RNA 紫外吸收的測(cè)定。因此能否有效地去除多糖、酚類化合物、RNase和干擾RNA 提取的其它代謝產(chǎn)物是提取高質(zhì)量植物RNA 成敗的關(guān)鍵。本文根據(jù)文獻(xiàn)綜述了解決上述植物RNA 提取過程中難點(diǎn)的相應(yīng)對(duì)策。
- 在線咨詢
-
-