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PCR完成后，建議將反應(yīng)液于1000× g (大約4000 rpm) 離心1～3 min以沉淀血細(xì)胞碎片，之后取上清進(jìn)行下游分析。該步驟可有效去除多種血液組分。當(dāng)使用高濃度血液模板時(shí)此步尤為重要，因?yàn)榻?jīng)過PCR循環(huán)，反應(yīng)管中會(huì)存在大量的血細(xì)胞碎片。這些碎片會(huì)干擾下游的檢測(cè)，如瓊脂糖電泳檢測(cè)。注意：由于血液本身的原因，PCR 結(jié)束后在 PCR 管的底部會(huì)出現(xiàn)透明凝膠狀物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象。
斑點(diǎn)氣單胞菌PCR檢測(cè)試劑盒對(duì)照反應(yīng)
在PCR結(jié)果分析時(shí)，不管是陽(yáng)性結(jié)果或陰性結(jié)果，如果沒有對(duì)照反應(yīng)，都不能確定結(jié)果是否可靠。為了便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，建議在進(jìn)行PCR時(shí)，設(shè)置陽(yáng)性和陰性PCR對(duì)照反應(yīng)以便于排除假陽(yáng)性或假陰性的干擾。
a）模板DNA：選用樣本純化的DNA。
b）引物的選擇：建議選擇該樣本較易擴(kuò)增的基因的引物，如 β-actin 基因或 GAPDH 等。
4.2 陰性對(duì)照
PCR反應(yīng)體系被污染會(huì)導(dǎo)致PCR結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性，需要設(shè)置陰性對(duì)照來排除。將使用的移液器槍頭浸泡在2× Blood Master Mix中，添加引物，ddH2O進(jìn)行PCR擴(kuò)增；另取ddH2O作為模板，用目的基因引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以排除PCR體系是否被污染和實(shí)驗(yàn)是否有其他污染源。
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