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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

單核細(xì)胞是血液中大的血細(xì)胞，是機(jī)體防御系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分。與其他血細(xì)胞比較，單核細(xì)胞內(nèi)含有更多的非特異性脂酶，并且具有更強(qiáng)的吞噬作用。它通過(guò)吞噬和產(chǎn)生抗體等方式來(lái)抵御和消滅入侵的病原微生物。

單核細(xì)胞能吞噬異物產(chǎn)生抗體，在機(jī)體損傷治愈、抗御病原的入侵和對(duì)的方面起著重要的作用。機(jī)體發(fā)生炎癥或其他都可引起單核細(xì)胞總數(shù)百分比發(fā)生變化，因此檢查單核細(xì)胞計(jì)數(shù)成為輔助診斷的一種重要方法。在機(jī)體的防護(hù)、和創(chuàng)傷愈治過(guò)程中起協(xié)同作用。盡管它們是血液中的一類細(xì)胞成分，但它們功能的發(fā)揮，更多地體現(xiàn)在循環(huán)管道外的器官組織中。在功能方面它們與這些器官組織中的許多細(xì)胞成分如巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等密切相關(guān)。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來(lái)源于外周血。

2)細(xì)胞鑒定：MO-1或MO-2熒光染色為陽(yáng)性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：半懸浮培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF原代 巨噬 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： NSE ELISA Kit

Mouse cytochrome C (Cyt-C) ELISA Kit 小鼠(Cyt-C)檢測(cè)試劑盒

RatThromboxaneB2,TXB2ELISAKit 大鼠血栓素B2(TXB2)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHBsAb乙型肝表面抗體

細(xì)胞氨含量光譜法定量檢測(cè)試劑盒20次

SheepIerleukin1,IL-1ELISAKit綿羊白介素1(IL-1)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

IFNA2重組小鼠 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

白細(xì)胞激活黏附因子(ALCAM)重組蛋白 Recombinant Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule (ALCAM)

PDGFRB重組人 PDGFRB / PDGFR-1 / CD140b 蛋白 Protein

FLRT2 Protein Human 重組人 FLRT2 蛋白

IFNA2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IFNA2 / Interferon alpha 2 蛋白

Annexin Ⅲ peptide 膜粘連蛋白A3抗體 0.5mgAnnexin Ⅲ peptide 膜粘連蛋白A3抗體

FLRT2 Protein Human 重組人 FLRT2 蛋白

GPA33重組小鼠 GPA33 / Glycoprotein A33 蛋白 Protein

C Protein Rat 重組大鼠 C / SLAMF2 / BCM1 蛋白

KDR重組人 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat coisol (Coisol) ELISA Kit 大鼠(Coisol)檢測(cè)試劑盒

Human15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISAKit 人15脂加氧酶(15-LO/LOX)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

humanB-cellleukemia/lymphoma3,Bcl3檢測(cè)試劑盒人B細(xì)胞淋巴瘤因子3(Bcl3)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物種子高質(zhì)化葉綠體分離試劑盒10次

Humaelomerase，TEELISAKit人端粒酶(TE)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人單核細(xì)胞豚鼠卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝