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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠胃平滑肌分離自胃組織；胃柔軟，活體呈橘紅色。胃空虛時形成許多皺襞，充盈時變平坦。胃壁由粘膜、粘膜下膜、肌膜和漿膜四層構成。粘膜上皮為柱狀上皮。上皮向粘膜深部下陷構成大量腺體（胃底腺、賁門腺、幽門腺），它們的分泌物混合形成胃液，對食物進行化學性消化。粘膜在幽門處由于覆蓋幽門括約肌的表面而形成環(huán)狀的皺襞叫幽門瓣。胃肌膜由三層平滑肌構成，外層縱形，中層環(huán)形，內層斜行，其中環(huán)形肌發(fā)達，在幽門處特別增厚形成幽門括約肌。胃平滑肌細胞源自胃的平滑肌層，細胞通過緊密連接，進行同步性運動，完成肌肉的舒縮活動，以推動食物前進，完成對食物的機械性消化，并促進化學性消化和吸收。胃平滑肌具有肌組織的共同特性，如興奮、自律性、傳導性和收縮性，在離體后，置于適宜的環(huán)境內，仍能進行良好的節(jié)律性運動，但其收縮很緩慢，節(jié)律性遠不如心肌規(guī)則。胃平滑肌對電刺激較不敏感，但對于牽張、溫度和化學刺激則特別敏感，輕微的刺激常可引起強烈的收縮。胃平滑肌的這一特性是與它所處的生理環(huán)境分不開的，胃內容物對平滑肌的牽張、溫度和化學刺激是引起內容物推進或排空的自然刺激因素。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠胃平滑肌采用膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠胃平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

人孕激素/孕(PROG)試劑盒   96T/48T

人原鈣黏素1(PCDH1)試劑盒   96T/48T

人(Protamine)試劑盒   96T/48T

人誘導型合成酶(iNOS)試劑盒   96T/48T

豚鼠白介素10(IL-10)試劑盒 ，英文名： IL-10 ELISA Kit

Human non neuronal enolase (NNE) ELISA Kit 人非神經元性烯醇化酶(NNE)試劑盒

rabbitiestinalfattyacidbindingprotein,iFABPELISAKit 兔子腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBeta2-GP1IgA/G/MELISAKit大鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M

細菌營養(yǎng)瓊脂平板50個

RabbitEpidermalgrowthfactor,EGFELISAKit兔子表皮生長因子(EGF)試劑盒規(guī)格：96T/48T

FCGR3A重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Phe, His 標簽) Protein

葡萄糖轉運蛋白1(GLUT1)重組蛋白 Recombinant Glucose Transporter 1 (GLUT1)

CGB5重組人 CGB5 蛋白 (Fc 標簽) Protein

JAG1 Protein Human 重組人 JAG1 / Jagged 1 / CD339 蛋白

HA Protein H12N1 重組甲型流感 H12N1 (A/mallard duck/Alberta/342/1983) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

葡萄糖轉運蛋白1(GLUT1)重組蛋白 Recombinant Glucose Transporter 1 (GLUT1)

JAG1 Protein Human 重組人 JAG1 / Jagged 1 / CD339 蛋白

FCGR3A重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Phe, His 標簽) Protein

HA Protein H12N1 重組甲型流感 H12N1 (A/mallard duck/Alberta/342/1983) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

CGB5重組人 CGB5 蛋白 (Fc 標簽) Protein

大鼠胃平滑肌細胞人乙型肝病毒X抗原(HBxAg)ELISA 試劑盒

Human tissue polypeptide specific aigen (TPS) ELISA Kit 人組織多肽特異性抗原(TPS)試劑盒

HumanangiotensionⅡreceptor1Aibody,ATⅡR1AbELISAKit 人血管緊張素Ⅱ受體1抗體(ATⅡR1)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanIerleukin4,IL-4試劑盒人白介素4(IL-4)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織亮(leucine)含量比色法定量試劑盒20次

HumanIerleukin23，IL-23ELISAKit人白介素23(IL-23)試劑盒規(guī)格：96T/48T