一个色综合网_97在线视频精品_精品久久亚洲_日韩精品一级中文字幕精品视频免费观看_一区二区在线观看免费视频播放 _国产精品理论在线观看_99国内精品_久久久久久久久久久网_欧美一级日本a级v片

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

兔表皮角化分離自皮膚組織；表皮位于動物皮膚的外層，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結構，由復層扁平上皮構成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質層。表皮角化細胞（KC）是構成表皮的主要細胞成分，在體內處于不斷增殖過程中，分裂的角化細胞主要位于其基底層，少數位于棘細胞層。隨著向表層的推移，細胞的分化程度逐漸增加，并喪失分裂活性。

方法簡介：

實驗室分離的兔表皮角化上皮先消化、后-膠原酶混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的兔表皮角化上皮經PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：上皮細胞樣

傳代特性：可傳1-3代左右；2代以內狀態佳

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔表皮角化上皮體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

兔子層連蛋白/板層素(LN)ELISA 試劑盒

Human vascular endothelial cell growth factor C (VEGF-C) ELISA Kit 人血管內皮細胞生長因子C(VEGF-C)檢測試劑盒

Humanai-gangliosideaibody,GM1ELISAKit 人抗抗體(GM1)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanErythropoietin,EPO檢測試劑盒人紅細胞生成素(EPO)檢測試劑盒規格：96T/48T

組織RSK3激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumanOsteogenicGrowthPeptide，OGPELISAKit人成骨生長肽(OGP)檢測試劑盒規格：96T/48T

CD86重組大鼠 CD86 / B7-2 蛋白 Protein

HIV gp120 艾滋病病毒(抗原 0.5mgHIV gp120 艾滋病病毒(抗原)

HSPD1重組人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

IL27 Protein Human 重組人 IL27 / Interleukin-27 蛋白

HDAC8 Protein Mouse 重組小鼠 HDAC8 / HDACL1 蛋白

HIV gp120 艾滋病病毒(抗原 0.5mgHIV gp120 艾滋病病毒(抗原)

IL27 Protein Human 重組人 IL27 / Interleukin-27 蛋白

CD86重組大鼠 CD86 / B7-2 蛋白 Protein

HDAC8 Protein Mouse 重組小鼠 HDAC8 / HDACL1 蛋白

HSPD1重組人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

豚鼠干擾素α(IFNα)檢測試劑盒 ，英文名： IFNα ELISA Kit

Calcium channel aibody (VGCC) ELISA Kit 人鈣離子通道抗體(VGCC)檢測試劑盒

RabbitCoisolELISAKit 兔子(Coisol)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBA(HumanBlockingaibody)ELISAKit人封閉抗體

線蟲基因組DNA分離試劑盒20次

Rabbitbonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKit兔骨形成蛋白(BMPs)檢測試劑盒規格：96T/48T

兔表皮角化上皮細胞人轉鐵蛋白（F）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人轉錄因子抗體-1(ATF-1)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人轉甲狀腺素蛋白(T)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人轉化生長因子β2(TGFβ2)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝