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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：兔真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞

英文名稱：Rabbit Dermal Microvascular Endothelial Cells

組織來源：皮膚

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

兔真皮微血管內(nèi)皮分離自真皮組織；真皮，位于表皮深層，向下與皮下組織相連，真皮結(jié)締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起，埋于基質(zhì)內(nèi)。其內(nèi)分布著各種結(jié)締組織細(xì)胞和大量的膠原纖維彈性纖維，使皮膚既有彈性，又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網(wǎng)狀層。真皮的結(jié)構(gòu)組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質(zhì)。微血管內(nèi)皮細(xì)胞（MEC）在炎癥反應(yīng)、腫瘤生長(zhǎng)、創(chuàng)面愈合過程中起著非常重要的作用。在創(chuàng)面愈合研究領(lǐng)域，由于表皮細(xì)胞、真皮成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)的成熟，人們對(duì)這兩種細(xì)胞早已進(jìn)行了大量深入的研究。與之相比，對(duì)參與創(chuàng)面愈合過程的另一種主要細(xì)胞——真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞，則因其體外分離培養(yǎng)技術(shù)的困難而使相關(guān)的研究受限。

實(shí)驗(yàn)室分離的兔真皮微血管內(nèi)皮采用膠原酶-混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔真皮微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔真皮微血管內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

大鼠17-α(17-αMT)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： 17-αMT ELISA Kit

Mouse thyroxine aibody (TAb) ELISA Kit 小鼠甲狀腺素抗體(TAb)檢測(cè)試劑盒

MouseBonemorphogeneticprotein6,BMP-6ELISAKit 小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanplatelet-derivedgrowthfactor,PDGFELISAKit人血小板衍生生長(zhǎng)因子

通用型總淀粉+直鏈+支鏈淀粉比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitET大鼠內(nèi)毒素

NP重組甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) Nucleocapsid / NP Protein

phospho-BAD(pSer128 0.5mgphospho-BAD(pSer128) 0酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體

HYOU1重組人 ORP150 / HYOU1 / HSP12A 蛋白 Protein

COL9A1 Protein Human 重組人 COL9A1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

CPE Protein Human 重組人 Carboxypeptidase E / CPE 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

phospho-BAD(pSer128 0.5mgphospho-BAD(pSer128) 0酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體

COL9A1 Protein Human 重組人 COL9A1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

NP重組甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) Nucleocapsid / NP Protein

CPE Protein Human 重組人 Carboxypeptidase E / CPE 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

HYOU1重組人 ORP150 / HYOU1 / HSP12A 蛋白 Protein

小鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human terminal compleme complex C5b-9 (TCC C5b-9) ELISA Kit 人末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)檢測(cè)試劑盒

HumanPeptideγ,PγELISAKit 人γ肽(Pγ)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

GoatPhosphorylatedadenosinemonophosphateactivatedproteinkinase,AMPK檢測(cè)試劑盒山羊0酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母0酸葡萄糖異構(gòu)酶(phosphoglucoseisomerase;GPI)活性光譜法定量檢測(cè)試劑盒20次

MouseClusterofdiffereiation30,CD30ELISAKit小鼠CD30分子(CD30)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞小鼠檢測(cè)試劑盒   小鼠試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠試劑盒、小鼠檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠牛血清白蛋白檢測(cè)試劑盒   小鼠牛血清白蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠牛血清白蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠牛血清白蛋白試劑盒、小鼠牛血清白蛋白檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠牛小腸堿性0酸酶檢測(cè)試劑盒   小鼠牛小腸堿性0酸酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠牛小腸堿性0酸酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠牛小腸堿性0酸酶試劑盒、小鼠牛小腸堿性0酸酶檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠檢測(cè)試劑盒   小鼠試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠試劑盒、小鼠檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用